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你真的会养细胞吗?聊聊养细胞的这些事

发布时间:2019-08-01

培养细胞首先得需要一款高品质的培养箱了,设备问题您可以咨询江苏金怡仪器。其次,细胞培养工作是需要一定的耐心的,作为新手,不经历些什么,你还真不好意思说自己会养细胞。你真的会养细胞吗?今天,我们就来聊聊养细胞的这些事

一、培养基中的黑点

在细胞培养过程中,有时候会发现有小黑点生成,小黑点就一定是污染吗?其实不然。一旦发现,首先我们要观察培养基是否会浑浊,然后观察培养细胞的状态,如果污染的话,培养基可能会变混,变黄。黑点出现的原因可能有以下几个方面:

1、细胞生长老化,细胞碎片形态;

2、血清质量不好,反复冻融; 经过热处理的血清,沉淀物显著增多,在倒置显微镜下观察,也像是小黑点

3、原代细胞培养过程中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。

二、细胞不贴壁

可能原因

1、胰酶消化过度,解决方法:适当缩短胰酶消化时间或降低胰酶浓度。

2、支原体污染,解决方法:分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。

3、培养瓶瓶底不干净,解决方法:换用新的培养皿或者培养瓶。

4、消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当,解决方法:重新配置消化液或培养液

5、细胞老化,解决方法:见上

6、接种细胞起始浓度太低或太高,解决方法:根据细胞特性接种适量的细胞。

总之,养细胞需要耐心,要温柔,要不然她真的会给你颜色看哦。

三、细胞污染

细胞污染的种类可分成细菌、霉菌、支原体、黑胶虫、真菌和原虫。主要的污染源为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。

1、细菌:培养液一般会浑浊变黄,细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,对细胞生长影响明显;

2、霉菌:培养液清亮,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,时间长之后,细胞的活力状态变差;

3、支原体:一般培养液会变浑浊。支原体是牛血清中zui常见的微生物之一,而国内很多都没有做支原体阴性检测,不能用过滤的方法除去。除很有经验的专家外,大多数支原体污染的细胞株,无法以其外观来分辨细胞是否被支原体污染,而且支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数,代谢等数据。支原体检测方法:PCRELISA、荧光染色等。

4、黑胶虫:培养液一般不混。可穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍镜下为黑色点状,高倍镜下为黑色的小虫游来游去。对细胞状态不会有太大的影响,在细胞增殖旺盛的时候会自然消失。

5、真菌:一般培养液清亮。镜下会有丝状物,有些真菌开始会像死细胞碎片,但是不像细胞碎片分不清,有很多很多小块,想珊瑚状,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌一般生长的鼻尖慢,不像细菌那么容易被发现。

6、原虫:培养液轻微浑浊,镜下的点状物数量很多,轻微活动,细胞虽然可以生长但是增殖速度明显缓慢细胞状态不好,边缘不清,细胞不透亮。与细胞共生争夺营养,等达到一定数量的时候就会影响到细胞的生长,形成恶性循环。

理论上,当细胞发生污染时,是可以通过一定方法去除的,但是整个过程耗时耗力,还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下,建议发现污染时立刻弃掉,重新培养。严格无菌操作技术、清洁的环境、使用品质良好的细胞株和培养基是减少污染的zui好方法。

四、生长缓慢

细胞培养过程中比较常见的问题,主要原因如下:

1、新配置的培养基以及换了新的血清,细胞不适应;解决方法,zui好使用zui适宜的培养基,如果条件不允许,可以换液时不要全量换液逐渐增加新的培养基比例,1/41/23/41,多传代几次,让细胞慢慢适应。

2、细胞密度不够。有些细胞是细胞依赖性细胞,密度过低生长缓慢;也可能是细胞分泌促生长活性物质过少,细胞连接不好等原因。解决办法:增加细胞接种密度;将细胞从大皿转移至小皿培养;适当增加培养基血清浓度。

3、培养环境改变:温度、CO2、细胞的生存环境要适宜。温度: 37 ℃; CO2: 5% pH: 72-74;渗透压等

4、污染:如支原体,细菌,真菌等

5、细胞本身状态:如衰老、、、解决办法:及时更换新的细胞

当然如果培养细胞是原代的话,生长速度是比较缓慢的。如果没有及时换液,营养成分不够,细胞也会生长缓慢。用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气,要保持培养箱内空气干净等。

其实只要条件适于细胞生长,细胞依旧是乖宝宝。

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